原核蛋白表达服务

中朊生物拥有超20年的蛋白表达经验，已成功交付1000+组蛋白，包括毒性蛋白、生长因子、酶等。主要应用于：作为抗原制备抗体，参与细胞实验与动物实验；测定蛋白酶活；研究蛋白相互作用(免疫共沉淀，GST pul down)；蛋白结晶结构研究，免疫组化实验等。不同的应用对于蛋白的要求也互不相同，在进行蛋白表达时，通常要考虑以下几点:

• 蛋白本身特性:蛋白的分子量大小，蛋白来源/物种，是否为毒性蛋白，蛋白翻译后修饰程度，蛋白结构复杂程度，在细胞内外的定位等;
• 蛋白表达系统选择:不同蛋白表达系统有不同的优势，如表达量高低，能否糖基化修饰等，结合蛋白应用并全面考虑，选择最合适的蛋白表达系统,
• 蛋白需求量:不同下游应用需求量有所区别，制备抗体需2~8mg，常规功能学研究10~200ug，细胞实验或药物研究则需更多;
• 蛋白纯化标签去留:蛋白纯化标签主要有HiS，GST，SUMO，MBP等。His标签只有0.84kd，利于纯化目对蛋白无影响，可以保留;其他属于大标签，可以提高蛋白可溶性，但需要切除，否则会影响蛋白结构功能。

原核表达

实验流程

原核表达案例

案例为蛋白酶A的制备，该蛋白的制备难点在于:
a.该蛋白酶自身含有酶切位点，表达很难获得目的蛋白，在前段加入一段非信号肽的前肽，可以抑制蛋白酶A的活性，再通过快速纯化获得,
b.在纯化过程中需要对该段前肽进行切除，需要低温快速纯化，难度较大;
c.切除后的蛋白不含有标签，不能用标签亲和纯化，需要利用磁珠对目的蛋白进行纯化。